page_banner

Uudised

Rakukultuuri korduma kippuvad küsimused

1. Kui saan tuubi külmutatud rakke, kas ma saan selle ladustamiseks otse vedelasse lämmastikku panna?

Paljudel juhtudel saab kuival jääl (-80°C) transporditud rakud vedelasse lämmastikku tagasi panna ja seejärel kiiresti üles sulatada.Kuid rakkude elujõulisus võib pärast sellist töötlemist väheneda.Mõne tundliku rakuliini puhul võib see raskendada rakkude taastumist.Arvatakse, et see nähtus on tingitud temperatuurimuutuse tagajärjel rakkudes olevate jääkristallide struktuuri muutumisest.Seetõttu on soovitatav rakud võimalikult kiiresti pärast kättesaamist üles sulatada ja kasvatada.Vähendage säilitusaega -80°C juures.Seda temperatuuri kasutatakse ainult transpordiks.

Korduma kippuvad rakukultuurid 1
Korduma kippuvad rakukultuurid 2
Korduma kippuvad rakukultuurid 4
Korduma kippuvad rakukultuurid 3

2. Milliseid ohutusmeetmeid tuleks võtta rakkude eemaldamisel vedelast lämmastikust taaskasutamiseks?

Vedelas lämmastikus olevad rakukrüotorud, mis ei ole täielikult suletud ja millesse lekib vedelat lämmastikku, võivad põhjustada plahvatuse, kui krüotoru temperatuur sulamisel järsult tõuseb.Seetõttu on vedelast lämmastikust rakkude eemaldamisel soovitatav kanda kaitseprille ja kaitsekindaid.Elustamiseks tuleb külmutustoru pidevalt loksutada 37°C veevannis, et külmutuslahus 1-2 minuti jooksul täielikult üles sulaks.Seejärel pühkige tuubi väliskülg alkoholiga lapiga, viige see ülipuhtasse lauda ja viige rakud tsentrifuugituubi, kuhu on lisatud 10 ml söödet, tsentrifuugige 1000 p/min 5-10 minutit, visake ära supernatant, lisage sobiv kogus söödet ja inokuleerige kultiveerimiskolbi ja inkubeerige 5% CO2 inkubaatoris.

3. Miks tuleks rakke hoida vedela lämmastikupaagi aurufaasis, mitte vedelas faasis?

Vedela lämmastiku gaasifaasis hoitud rakud taaselutuvad tõenäolisemalt.Kui vedela lämmastiku vedelas faasis, kui lüofiliseerimistorud ei ole korralikult suletud või lekivad, võib rakkude ja vedela lämmastiku vaheline otsekontakt kahjustada rakkude elujõulisust pärast sulatamist.

4. Kuidas suspensioonrakkude puhul söödet vahetada?

Suspensioonirakkude kultiveerimine võib toimuda lihtsalt värske söötme lisamisega (kui ruum võimaldab) või eraldades rakud vanast söötmest tsentrifuugimise teel (100 xg 5 minutit) ja seejärel resuspendeerides sadestunud rakud värskes söötmes.Enamiku suspensioonrakuliinide puhul on aga parem meetod lihtsalt söötme lisamine.Mõlemal juhul tuleb söödet uuendada, enne kui rakud saavutavad suurima küllastustiheduse.Rakkude küllastustihedus varieerub vahemikus 3 x 10 5 kuni 2 x 10 6 sõltuvalt rakuliinist ja kultiveerimistingimustest (puhkamine või segamine, hapnikusisaldus jne).Rakud tuleb lahjendada madalama rakukontsentratsioonini, et võimaldada piisavat toitainete taastumist, et rakud kasvaksid logaritmiliselt.Kui söödet lihtsalt vahetatakse ilma rakkude tihedust vähendamata, kahanevad rakud söödet kiiresti ja surevad.Kui rakud lahjendatakse alla nende väikseima tiheduse, sisenevad nad viivitusfaasi ja kasvavad väga aeglaselt või surevad.Igal suspensioonrakuliinil on erinev küllastustihedus ja passaažiintervall, seega on suspensioonrakuliinide* jälgimiseks igapäevane rakkude arv.

5. Milline on rakukultuuri soovitatav CO2 tase?

Kuigi CO2 tase rakukultuurisüsteemides on vahemikus 0,03% kuni 40% (tavaliselt umbes 0,03% CO2 atmosfääris), on väga tavaline, et õhku CO2 ei lisata või CO2 kontsentratsioon on 5% kuni 10%.Oluline on reguleerida naatriumvesinikkarbonaadi kontsentratsiooni keskkonnas, et see oleks tasakaalus gaasifaasi CO2 tasemega.Rakud toodavad CO2 ja vajavad kasvuks ja ellujäämiseks väikest kogust süsihapet.Kui CO2 ei lisata ja rakud paljunevad, võib kasutada 4 mM (0,34 g/l) veevaba naatriumvesinikkarbonaati.Siiski tuleks kultuurikolbi kaas sel hetkel kinni keerata.Kui kultiveerimissüsteem vajab 5% või 10% CO2, kasutage vastavalt 23,5 mM (1,97 g/L) või 47 mM (3,95 g/L) naatriumvesinikkarbonaati temperatuuril 37 °C algse pH väärtusega ligikaudu 7,6.Nendel tingimustel tuleks kolb jätta korgita või kasutada gaasitasakaalu säilitamiseks Petri tassi.

6. Miks vajavad mõned rakud naatriumpüruvaati?Kui palju naatriumpüruvaati peaksin söötmele lisama?

Püruvaat on orgaaniline happe metaboliit glükolüütilisel teel*, mis siseneb ja väljub kergesti rakust.Seetõttu annab naatriumpüruvaadi lisamine söötmele nii energiaallika kui süsinikuallika anabolismiks, aitab säilitada teatud spetsiifilisi rakke, aitab rakkude kloonimisel või on vajalik, kui seerumi kontsentratsioon söötmes väheneb.Naatriumpüruvaat aitab vähendada ka fluorestsents-indutseeritud tsütotoksilisust.Naatriumpüruvaati lisatakse tavaliselt lõppkontsentratsioonis 1 mM.kaubanduslikult saadavad naatriumpüruvaadi lahused on tavaliselt 100 mM säilituslahus (100X).

Tõlgitud saidiga www.DeepL.com/Translator (tasuta versioon).


Postitusaeg: 21. juuni 2022